CAR-T细胞疗法用于乳腺癌：现状与未来展望-上

小五

来源:觅健 2025-03-08 17:39:08

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关键词：三阴

Giuseppe Buono 糖果读书笔记

2025年02月27日 11:50 北京听全文

CAR-T细胞疗法用于乳腺癌：现状与未来展望

Giuseppe Buono , Monica Capozzi , Roberta Caputo , Vincenzo Di Lauro , Daniela Cianniello , Michela Piezzo , Stefania Cocco , Claudia Martinelli , Annarita Verrazzo , Margherita Tafuro , Claudia Calderaio , Alessandra Calabrese , Francesco Nuzzo , Martina Pagliuca , Michelino De Laurentiis

闲云潭影日悠悠，物换星移几度秋。温庭筠

亮点

• CAR-T细胞在靶向乳腺癌亚型耐药性方面显示出潜力。

• CAR-T细胞靶向乳腺癌中的肿瘤特异性抗原。

• 乳腺癌免疫抑制微环境阻碍CAR-T细胞的功能。

• 靶向新型肿瘤抗原可能增强CAR-T在乳腺癌中的特异性。

• CAR结构的改造可能减少乳腺癌的免疫逃逸和耗竭。

摘要

在不断扩展的乳腺癌（BC）治疗领域内，转移性乳腺癌（MBC）几乎无法治愈，并且往往会对传统治疗产生抵抗，最终导致患者转移进展和死亡。细胞免疫疗法（CI），尤其是嵌合抗原受体工程化T细胞（CAR-T细胞），已成为应对这一挑战的有前景的方法。在其对血液癌症显著疗效的背景下，CAR-T细胞也被用于临床需求最为迫切的患者——即那些具有侵袭性的乳腺癌患者。不幸的是，目前的治疗结果远未能复制这种成功，主要是由于肿瘤特异性抗原的稀缺和乳腺癌内的免疫抑制微环境。在此，本文提供了有关CAR-T细胞疗法在乳腺癌应用的最新临床前和临床数据的概述，通过调查现有文献，讨论了这种治疗方法的主要限制，概述了在乳腺恶性肿瘤背景下推进该疗法的可能策略。这些策略可能包括利用合成生物学来精细化抗原靶向和减轻脱靶毒性，利用逻辑门控CAR结构增强特异性，以及利用装甲CAR重新塑造肿瘤微环境。使用可诱导基因开关和外部触发器对CAR-T细胞进行时间和空间调控，进一步提高了安全性和功能性。此外，通过化学趋化因子受体工程促进T细胞归巢，以及利用通用CAR平台增强生产工艺，扩大了治疗的适用性。这些创新不仅解决了抗原逃逸和T细胞耗竭问题，还优化了CAR-T细胞疗法的疗效和安全性。因此，本文描绘了CAR-T细胞从一种有前景的实验方法演变为乳腺癌治疗标准方式的轨迹。

引言

在2023年，尽管治疗方法不断发展，女性乳腺癌（BC）在发病率和死亡率上仍然位居首位。根据以下生物标志物：雌激素受体（ER）、孕激素受体（PgR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）和Ki-67，乳腺癌可分为四个主要亚型– Luminal A型、Luminal B型、HER2阳性（HER2+）和三阴性（TN）。这些亚型对治疗的反应不同。内分泌治疗对Luminal亚型有效，单克隆抗体（mAb）对HER2+有效，而三阴性乳腺癌的治疗主要依赖化疗。尽管转移性乳腺癌（MBC）在适当治疗下仍可控，但它几乎是不可治愈的，因为它往往会发展出抗药性，导致疾病进展和死亡。因此，对于耐药性转移性乳腺癌（MBC）迫切需要新的治疗方法。免疫疗法利用免疫机制消灭癌细胞，代表了一种潜在的变革者。尽管乳腺癌（BC）长期以来被定义为免疫冷肿瘤且不太可能引发强烈的免疫反应，但现在已知三阴性（TN）和人表皮生长因子受体2阳性（HER2 +）亚型由于高度基因组不稳定性而具有潜在的免疫原性。实际上，由基因组不稳定性导致的突变负荷（每个肿瘤的体细胞突变数量）不仅标志着基本细胞过程的失调，还意味着产生作为肿瘤特异性抗原供宿主免疫监视的突变癌肽。值得注意的是，较高的突变负荷反映出肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的相似增加，进一步支持了积极的抗肿瘤免疫反应正在发生的观点。TILs 对肿瘤相关抗原（TAAs）具有特异性，其增加的存在与新辅助和辅助治疗中的预后改善相关。此外，在程序性细胞死亡配体1（PD-L1）阳性的转移性三阴性乳腺癌（TNBC）中，将免疫检查点抑制剂添加到化疗中可提高治疗效果。考虑到这些发现，继续探索免疫治疗是必要的。虽然这尤其适用于高度免疫原性的TNBC，但免疫机制在所有乳腺癌中都发挥作用。免疫细胞与肿瘤微环境（TME）之间持续相互作用，肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的组成决定了活跃免疫反应与抑制免疫反应之间的平衡。HER2阳性乳腺癌（HER2+ BC）患者的肿瘤中往往会出现免疫抑制细胞的浸润（例如调节性T细胞和M2极化巨噬细胞）。这种免疫抑制性TME阻碍了对新辅助治疗（如曲妥珠单抗联合拉帕替尼）的预期反应，导致HER2+ BC患者的TILs减少。鉴于许多乳腺癌患者对传统免疫治疗的反应有限，细胞免疫治疗（CI）在转化医学和临床环境中的关注度逐渐增加。CI涉及提取、修改、采用患者的免疫细胞进行治疗目的的再注射。随着当前基因修饰技术的不断发展，细胞免疫疗法（CI）有望成为一种常规治疗手段，既可以单独使用，也可以与靶向治疗相结合。在乳腺癌（BC）领域，有两种主要类型的CI正在接受研究：获得性细胞疗法（ACT）和树突状细胞（DC）免疫治疗。ACT侧重于增强免疫效应细胞的活性和细胞毒性潜力，而DC免疫治疗则专注于通过优化抗原识别与呈递来激活针对性的免疫应答，以增强免疫系统的反应能力。本文重点讨论ACT，即嵌合抗原受体（CAR）工程化T细胞。CAR-T细胞经过基因修饰，以靶向癌症标记物并触发免疫反应。本文概述了CAR-T细胞生物学、它们在乳腺癌治疗中的应用、潜在抗原、正在进行的临床试验及未来展望。

CAR-T细胞疗法：一种“活”的药物

ØCAR-T细胞生物学基础

当CAR在T细胞膜上表达时，CAR重新编程T细胞，以靶向肿瘤相关抗原（TAA），增强它们的激活、增殖和细胞毒性。CAR结合了T细胞受体（TCR）和单克隆抗体（mAb）的元素。内源性TCR由α和β亚单位组成，具有可变（V）和恒定（C）区域（图1a），这些区域对于与主要组织相容性复合体（MHC）的肽相互作用至关重要。TCR信号传导依赖于CD3复合物，其中包括CD3γε、CD3δε和CD3ζζ（图1b）。每个CD3γ/δ/ε亚单位具有一个细胞外免疫球蛋白（Ig）结构域和一个免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM），而CD3ζ包含一个短的细胞外结构域（ECD）和三个ITAM（图1b）。在CAR构建中，TCR的可变结构域（图1c）被来自单克隆抗体（mAb）的单链可变片段（scFv）替代（图1a），允许MHC独立识别肿瘤特异性抗原（TAA）。这带来了两个优势：它防止了通过MHC下调造成的肿瘤逃逸，并使CAR-T细胞能够检测非肽抗原。然而，缺点包括对细胞内抗原的靶向有限，以及由于抗原缺失或下调导致治疗失败的风险。典型的CAR还包括一个“铰链”区域、一个跨膜结构域和细胞内信号传导域（图1c）。

图1. 一般TCR、抗体和CAR的结构组成。a) 人类免疫球蛋白是Y形的蛋白质，由两个相同的轻链（LCs）和两个相同的重链（HCs）组成。完整的抗体结构由两个抗原结合片段（Fabs）和一个结晶片段（Fc）组成，通过铰链区域连接。两个Fab均具有相同的抗原结合位点，允许与目标抗原特异性结合。Fab的Fv区域由两个可变轻链（VL）和两个可变重链（VH）区域组成，分别由LC和HC贡献。相对而言，Fc区域参与与多种受体分子的结合，影响效应功能。b) 内源性TCR是一个异二聚体，包含α和β亚单位，每个由可变（V）和恒定（C）区域域组成，后接一个跨膜区域。每个V域包含三个互补决定区（CDRs），这些CDRs对于与在主要组织相容性复合体（MHC）上呈递的肽相互作用至关重要。值得注意的是，TCR缺乏内源性信号转导域，需要在与T细胞表面相互作用时通过CD3复合体来启动细胞内信号。CD3复合体由三个二聚体组成：CD3γε和CD3δε异源二聚体以及CD3ζζ同源二聚体。CD3γ/δ/ε亚单位各自具有一个单一的细胞外免疫球蛋白（Ig）域和一个免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM）。相对而言，CD3ζ具有一个短的细胞外域（ECD）和三个ITAM。c）单链可变片段（scFv），在CAR-T细胞中负责抗原识别特异性的成分，源于通过短肽连接物将单克隆抗体的一个轻链可变区（VL）和一个重链可变区（VH）连接起来，这种结构赋予了灵活性和溶解性。单链可变片段（scFv）与铰链区域结合形成CAR的细胞外域。铰链增强了CAR的灵活性，减少了与靶细胞的空间限制。跨膜结构域具有疏水性α-螺旋，通过桥接细胞外信号域和细胞内信号域来稳定CAR。常用的跨膜成分来源于CD4、CD8α、CD28和CD3ζ。信号组成部分通过ITAM磷酸化进行激活。

自1987年概念提出以来，CAR（嵌合抗原受体）已根据细胞内结构域的组织演变为第五代（图2）。第一代CAR仅具备一个CD3ζ结构域，但其临床效益有限。第二代CAR增加了共刺激结构域，改善了细胞因子的分泌、CAR-T细胞的增殖及抗肿瘤效能。CD3ζ通常负责激活信号，而来自CD28受体家族（如CD28和ICOS）或肿瘤坏死因子受体家族（如4-1BB、OX40和CD27）的结构域提供共刺激信号。第三代CAR包含两个共刺激结构域，增强了CAR-T细胞的功能。第四代构建还包含用于转基因蛋白表达的表达载体（例如白细胞介素-12（IL-12）释放。第五代受体在第二代CAR中增加了JAK-STAT激活域，以促进细胞的激活和持久性。

图2. CAR的发展历程。第一代CAR由一个细胞外识别域、一个铰链区、一个跨膜域和一个单一的细胞内CD3ζ信号域组成。第二代CAR增加了一个共刺激域（例如CD28或4-1BB），从而提高CAR-T细胞的扩增、持久性和细胞因子分泌。第三代构建在一个受体中结合了两个共刺激域，以利用多条信号通路的优点。第四代CAR包括一个在T细胞反应期间释放的转基因蛋白的构成性或诱导性表达盒（例如IL-12）。在第五代构建中，IL-2RB中的JAK-STAT激活域被添加到第二代CAR中，以增强细胞激活，防止终末分化，并促进持续的持久性。

CAR-T细胞的激活是由抗原结合触发的，导致细胞毒性、细胞因子产生、增殖和长期记忆的形成。此激活是由CD3ζ和共刺激域介导的，导致淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lck）和ZAP-70等酪氨酸激酶催化CD3ζ ITAMs的磷酸化。

不同的共刺激域赋予CAR-T细胞不同的抗肿瘤特性。例如，CD28-CAR显示出快速的肿瘤清除能力，但持久性较短，而4-1BB-CAR则分化为中央记忆T细胞，适合于长期治疗。含有ICOS的CAR-T细胞在体内的持久性优于基于CD28或4-1BB的CAR。

增强CAR-T细胞功能必须谨慎平衡。抗原亲和力过高可能导致毒性事件，而亲和力不足则会导致次优激活。因此，单链变体（scFv）的亲和力调节对于有效靶向肿瘤并保护正常细胞至关重要。铰链区和跨膜域的调整、ITAM数量以及信号单元的接近度也会影响CAR的功能。

ØCAR-T细胞的生产

CAR-T细胞可以来源于患者自身（自体T细胞）或健康供体（异体T细胞）。自体T细胞提供安全性和潜在的长期移植能力，但面临患者特异性T细胞扩展需求、剂量单位有限和生产成本高等挑战。因此，开发一种异体的“即用型”CAR-T细胞产品是非常理想的，这样可以实现每批次多个剂量的生产，更好的控制、更快的交付和降低成本。CAR-T细胞的生产通常使用αβ T细胞，这些细胞的特征是存在TCR α/β（图1b），它们构成了循环T细胞的主要部分。然而，αβ T细胞可能会引发移植物抗宿主病（GvHD），这是由于TCR介导的对异体MHC复合物的识别所导致的。为此，已经开发出基因组工程方法来失活内源性TCR，通常针对TCRα链进行修饰。转录激活因子样效应核酸酶（TALEN）和成簇的调控间隔短回文重复（CRISPR/Cas9）等技术已被用于敲除TCRα链和CD52，使得CAR-T细胞对淋巴耗竭方案具有抵抗力，并解决了与插入突变相关的安全性问题。自体CAR-T细胞的生产涉及五个关键步骤：

1. T细胞的采集、分离和激活。T细胞通常通过白细胞分离术获取，特定抗体可以富集或去除某些亚群的白细胞。例如，抗CD8/CD4抗体可以富集T辅助细胞和T细胞毒性细胞。收集的T细胞在进行基因修饰前需要激活，可以通过使用抗CD3抗体联合IL-2、涂有抗CD3/CD28抗体的顺磁珠或人工抗原呈递细胞（APC）系实现。

2. T细胞重编码。这涉及使用病毒（γ-逆转录病毒或慢病毒）或非病毒方法（转座子系统、DNA载体、CRISPR/Cas9或mRNA转染）将CAR转基因导入T细胞中。病毒方法普遍使用，但成本较高。而非病毒方法提供稳定或瞬时的CAR表达。

3. CAR-T细胞扩增。为了获得足够的CAR-T细胞用于肿瘤靶向，经过重新编码的T细胞进行体外扩增。摇动运动生物反应器的效果优于培养瓶或静态袋。

4. 条件处理。输注前的条件处理，通常是淋巴耗竭化疗，增强了输注CAR-T细胞在体内的扩增和持久性。条件方案清除了“细胞因子耗尽区”并耗竭了免疫抑制细胞，使CAR-T细胞能够获取体内稳态细胞因子，并促进JAK-STAT介导的扩增。它们还诱导免疫刺激分子的产生，并下调免疫抑制酶吲哚胺双加氧酶（IDO）。

5. CAR-T细胞输注。在条件处理后，CAR-T细胞将在四周内输注到患者体内。延迟可能需要新的条件处理。静脉输注（IV）大约需要30分钟，患者需提前用药以减少急性反应。监测细胞因子释放综合症（CRS）和其他毒性反应是至关重要的，医生应准备好处理严重反应。

图3. 自体CAR-T细胞生产的主要阶段。自体CAR-T细胞的制造涉及五个主要步骤。1) T细胞的收集、分离和激活。从患者的血液中去除白细胞，对特定细胞亚群进行富集或去除，并通过不同的方法进行激活。2) T细胞的重编程。然后在实验室中使用病毒或非病毒方法将CAR转基因插入T细胞中。该基因编码经过工程改造的CAR蛋白，表现在患者T细胞的表面，从而生成CAR-T细胞。3) CAR-T细胞扩增。百万级的CAR-T细胞在体外培养。4) 条件处理。患者接受输注前的条件处理（例如...）淋巴耗竭化疗）以促进CAR-T细胞在体内的扩增和持久性。5）CAR-T细胞输注。患者通过静脉或局部给药接受CAR-T细胞。在患者体内，CAR-T细胞识别并杀死表面携带目标抗原的癌细胞。

总之，尽管自体CAR-T细胞仍然是主要的临床应用，但基因工程和生产方法的进展正在为更高效、成本更低的异体CAR-T细胞疗法铺平道路。

CAR-T细胞疗法在乳腺癌中的应用

采用患者来源的CAR-T细胞进行免疫治疗在治疗血液癌症方面已取得积极效果，并且已有多种产品获得商业化。小规模的临床研究也记录了用CAR工程化T细胞治疗的癌症和脑癌患者的完全应答。然而，针对其他实体肿瘤，包括乳腺癌的CAR-T疗法试验却取得了不尽如人意的结果。在此，本文将探讨有关CAR-T疗法在乳腺癌（BC）方面的临床见解和限制，并解释基因编辑的进展如何提升这种疗法的有效性和安全性。

Ø乳腺癌的临床前研究和临床研究

已经提出了几种蛋白质作为CAR-T细胞疗法在乳腺癌中的候选靶点：

I) 受体酪氨酸激酶（RTKs），包括HER2、上皮生长因子受体（EGFR）、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ROR1）、c-Met和AneXeLekto（AXL）。

II) 细胞表面蛋白，包括间皮素（MSLN）、粘蛋白细胞表面关联蛋白（MUC1）、夹层蛋白6（CLDN6）、CD70、包含变异外显子v6的CD44（CD44v6）、上皮细胞粘附分子（EpCAM）、CD133、叶酸受体-α（FRα）、肿瘤内皮标记物8（TEM8）。硫酸软骨素蛋白聚糖4 (CSPG4)、细胞内粘附分子-1 (ICAM-1) 和滋养层细胞表面抗原2 (TROP2)。

III) 其他蛋白，包括自然杀伤细胞组2成员D配体 (NKG2DLs)、癌胚抗原 (CEA) 和二唾液酸神经节苷脂 (GD2)。

一些靶点仅在乳腺癌的前临床模型中进行研究，而其他靶点则已进入临床试验（表1、表2、表3）。

缩略语：AXL “AneXeLekto” 受体酪氨酸激酶；Balb/c 白化，实验室培育的品系小鼠；B-NSG 免疫缺陷 NOD SCID Gamma；CAR 嵌合抗原受体；CSPG4 硫酸软骨素蛋白多糖 4；EGFR 表皮生长因子受体；FRα 叶酸受体 α；Gas6 生长 Arrest 特异性蛋白 6；GD2 二唾液醇脂质；HER2 人类表皮生长因子受体 2；HER3 人类表皮生长因子受体 3；HER4 人类表皮生长因子受体 4；HRG1β Heregulin-1β；PD-L1 程序性细胞死亡配体 1；ICAM-1 细胞内粘附分子-1；IL-2 白细胞介素 2；IL-7 白细胞介素 7；MSLN 膜表面蛋白；tMUC1 肿瘤相关粘蛋白 1；MUC28z 嵌合抗原受体，由 TAB004 的 scFv 与 CD28 和 CD3ζ 结合组成；NKG2D 自然杀伤细胞组2 D 受体；NKG2DLs 自然杀伤细胞组2 D 配体；NOD 非肥胖型糖尿病；NSG NOD Scid Gamma；PD-1 程序性细胞死亡1；PDX 患者来源异种移植；ROR1 类似受体酪氨酸激酶孤儿受体1；SCID 严重联合免疫缺陷；TEM8 肿瘤内皮标记8。

缩略语：不良反应（AEs）；急性淋巴细胞白血病（ALL）；急性髓性白血病（AML）；乳腺癌（BC）；嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）；癌胚抗原（CEA）；慢性淋巴细胞白血病（CLL）；细胞因子释放综合症（CRS）；剂量限制性毒性（DLT）；人类表皮生长因子受体2（HER2）；肺非小细胞癌（LNSCC）；转移性乳腺癌（MBC）；淋巴细胞表面黏附分子（MSLN）；最大耐受剂量（MTD）；粘蛋白1（MUC1）；自然杀伤细胞2组D受体（NKG2D）；自然杀伤细胞2组D配体（NKG2DL）；非小细胞肺癌（NSCLC）；客观缓解率（ORR）；总体生存期（OS）；无进展生存期（PFS）；扩展推荐剂量（RDE）；类人受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ROR1）；反应率（RR）；可溶性淋巴细胞表面黏附分子相关肽（SMRP）；三阴性乳腺癌（TNBC）。

图片缩略语：不良反应（AEs）；乳腺癌（BC）；B7H3（B7同源物3）；C7R（持续激活的白介素7细胞因子受体）；CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）；CD44v6（含有变异6的CD44）；癌胚抗原（CEA）；脑脊液（CFS）；Claudin 6（CLDN6）；疾病控制率（DCR）；剂量限制性毒性（DLT）；反应持续时间（DOR）；表皮生长因子受体（EGFR）；上皮细胞黏附分子（EpCAM）；二唾液酸神经节苷脂（GD2）；人类表皮生长因子受体2（HER2）；转移性乳腺癌（MBC）；间皮素（MSLN）；最大耐受剂量（MTD）；粘蛋白1（MUC1）；MUC1*（MUC1胞外结构域的缺失版本）；MUC1C（与MUC1相关的C末端）；非小细胞肺癌（NSCLC）；客观反应率（ORR）；总体生存期（OS）；P-MUC1C-ALLO1 MUC1相关C端异种1；PFS 无进展生存期；RP2D 推荐的第2阶段剂量；RR 反应率；TLT 治疗限制性毒性；TME 肿瘤微环境；TNBC 三阴性乳腺癌；TnMUC1 MUC1的Tn糖型。

ØRTK靶点

HER2是细胞外蛋白配体表皮生长因子家族的成员。它可以与同一家族的其他成员HER3和HER4形成异二聚体，启动支持致癌的下游信号通路。针对HER3/HER4的CAR-T细胞疗法在细胞系和异种移植模型中表现出显著的抑制肿瘤生长的疗效（表1）。在临床前模型中，专门针对HER2的CAR-T治疗有效且特异性地减弱了细胞增殖和肿瘤生长（表1）。2020年，两个临床试验开始研究针对HER2的CAR-T细胞疗法的可行性、疗效和安全性（NCT04511871，表3，以及NCT04650451，表2）。虽然第一项研究仍在积极招募参与者，后者已被制造公司停产，因为接受类似CAR-T细胞（BPX-601）治疗的前列腺癌患者经历了严重的免疫介导不良事件，包括4级细胞因子释放综合症（CRS）。另一项I期临床试验已启动，旨在评估自体HER2特异性CAR-T细胞与二元溶瘤腺病毒CAdVEC的肿瘤内注射联合使用的安全性和疗效（NCT03740256，表3）。溶瘤病毒（OVs）是一种联合疗法，旨在针对肿瘤免疫逃逸机制。通过使用活性或基因工程病毒，OVs能选择性地在肿瘤细胞内复制，从而导致癌细胞的裂解、免疫反应的刺激以及在肿瘤微环境（TME）内传递治疗性转基因。临床前研究表明，将CAR-T细胞与肿瘤病毒（OVs）结合，可以增强CAR-T细胞的归巢能力，提高抗肿瘤活性，并消除抗原阴性的肿瘤细胞。将这一方法转化为临床实践的挑战包括围绕抗病毒免疫、OV给药途径、安全性和成本的担忧。另一种有前景的组合疗法是将CAR与PD-1抗体配对，已在trastuzumab耐药的HER2+/PD-L1过表达模型中显示出强大的治疗活性（表1）。为了减轻与系统性施用单克隆抗体（mAbs）相关的自身免疫毒性，可以利用基因编辑方法（如CRISPR/Cas9、TALEN核酸酶）对CAR-T细胞进行工程改造，使其能够产生检查点抑制剂（如PD-1/PD-L1）。和锌指核酸酶（ZFNs）。利用CRISPR/Cas9技术，在患者来源的、有效肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中已经敲除PD-1基因（NCT04842812，表3）。在相同细胞中，电子转染诱导了针对PD-1和CTLA4的单链抗体（scFv）的表达。此外，为了增强细胞毒性潜力，已对无效肿瘤的TILs进行基因修饰，以表达不同抗原的各种嵌合抗原受体（CARs）。

约45% –70% 的三阴性乳腺癌（TNBC）表现出EGFR过表达，并且预后较差。针对TNBC模型测试的EGFR特异性第三代CAR-T细胞显示出强劲且特异的抗肿瘤活性，且毒性率较低（表1）。有趣的是，肿瘤细胞中EGFR基因重排较为常见，提供了潜在的治疗特异性。例如，EGFRvIII突变仅发生在恶性细胞中。在三阴性乳腺癌（TNBC）中，EGFRvIII的表达及其功能作用仍然是一个有争议的话题，而在胶质母细胞瘤（GBM）中，特异性针对EGFRvIII的CAR-T细胞能够迁移至肿瘤并识别其抗原，且没有与野生型EGFR的交叉反应，也没有目标相关的肿瘤外毒性（OTOT）和细胞因子释放综合症（CRS）的证据。一些接受治疗的患者表现出抗原水平的下降，这突出了避免抗原逃逸的重要性。为此，可能的策略是通过在单个T细胞中表达具有不同特异性的多个CAR，来靶向肿瘤细胞上的多个抗原。或者，可以使用双特异性CAR（或串联CAR）。具有两个不同抗原识别域的单一受体。在2022年，开展了一项I期临床试验，以评估针对EGFR和I型跨膜蛋白B7同源物3（B7H3）的CAR-T细胞的安全性和客观反应率（ORR）（NCT05341492，见表3）。

ROR1是一种I型孤儿受体酪氨酸激酶样蛋白，在胚胎-胎儿发育中发挥重要作用，并且在成年人组织中几乎不存在。多种癌细胞类型表达ROR1，其表现出致癌基因的特性。在三阴性乳腺癌（TNBC）病例中，ROR1的强表达与较短的无疾病生存期、无远处转移生存期和总体生存期相关。在三维（3D）肺和乳腺癌模型上进行的研究显示，抗ROR1 CAR-T细胞治疗具有显著的抗肿瘤效果（见表1）。一项涉及四名乳腺癌患者的I期临床试验使用了递增剂量的抗ROR1 CAR-T细胞，在剂量水平1和2中未出现明显的剂量相关毒性、严重神经毒性或高于G1的细胞因子释放综合征（CRS）（NCT02706392，表2）。

c-Met的表达升高是三阴性乳腺癌（TNBC）的一个常见特征，与显著缩短的无复发生存期和总体生存期相关。c-Met作为免疫治疗CAR-T细胞靶点的地位日益重要。2013年，启动了一项I期临床试验，以评估通过肿瘤内注射RNA电转化的c-Met靶向CAR-T细胞治疗转移性TNBC的安全性和可行性（NCT01837602，表2）。没有患者报告CAR-T细胞相关的毒性高于G1级。切除肿瘤的免疫组织化学分析显示，在注射部位出现了广泛的肿瘤坏死、c-Met免疫反应性丧失、细胞碎片以及巨噬细胞浸润。然而，在远处转移部位未观察到可测量的临床反应。随后的I期研究结果表明，抗c-Met CAR-T细胞的静脉注射在转移性三阴性乳腺癌（TNBC）患者中也是安全且可行的（NCT03060356，表2）。未发生超过G2级别的毒性、神经毒性、细胞因子释放综合症（CRS）或治疗中断。四名患者达到了稳定病情，而三名患者则出现了疾病进展。

AXL过表达是乳腺癌的一个共同特征，它维持肿瘤细胞的存活、迁移和侵袭，并与不良预后相关联。针对AXL的CAR-T细胞在AXL阳性的三阴性乳腺癌（TNBC）细胞系和异种移植物中表现出了显著的抗肿瘤疗效（表1）。此外，与持续激活的IL-7受体CR7共同表达的抗AXL CAR增强了CAR-T细胞在体外和体内模型中的活性（表1）。CR7通过激活IL-7信号通路，延长了肿瘤特异性T细胞在体内的生存时间，从而增加了抗肿瘤效果。

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参考文献：Cancer Treat Rev. 2025 Feb:133:102868. doi: 10.1016/j.ctrv.2024.102868. Epub 2024 Dec 27.

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